Il museo occupa gran parte di un antico convento dei Vallombrosani intitolato a San Salvi e prende il nome dal Cenacolo, un grande affresco raffigurante l'Ultima Cena, posto nel refettorio, opera di Andrea del Sarto, uno dei capolavori della pittura rinascimentale. Nei vasti locali del convento sono collocati importanti dipinti della prima metà del Cinquecento, che documentano lo sviluppo della pittura fiorentina di quel periodo. Tra questi opere di Pontormo, Andrea del Sarto, Franciabigio, Raffaellino del Garbo, Giuliano Bugiardini, Bachiacca.
Si segnala inoltre il Monumento funebre a San Giovanni Gualberto, fondatore dei vallombrosani, ordinato nel 1505 a Benedetto da Rovezzano e rimasto incompiuto. Nel piano superiore, è ordinato un vasto deposito di opere delle Gallerie Fiorentine.

Orario di visita: Da martedì a domenica, ore 8:15-13:50. Chiusura: tutti i lunedì, Capodanno, 1° maggio, Natale.

Biglietto: Ingresso libero.

Persone disabili: Il Museo è accessibile alle persone disabili.

Scuole: L'ingresso è gratuito.

Comunicazioni con la direzione del Museo: Tel: 0552388603, Fax: 0552388699.